激光捕获显微切割显微镜（LCM）是一种结合激光技术与显微镜优势，用于从组织切片中精准分离和收集特定细胞或组织区域的技术，其技术步骤如下：
一、准备工作
样本准备：
选择适合的组织或细胞样本，并进行适当的收集和处理。
使用适当的固定剂（如福尔马林）固定样本，防止组织退化。
将样本切割成薄片，通常厚度为5-10微米，以便于观察。
将切片放置在预处理的载玻片上，确保切片平整且无气泡。
染色（可选）：
根据需要对切片进行染色，如H&E染色、免疫组织化学染色等，以便更好地识别目标细胞。
显微镜调节：
将切片放置在显微镜下，调整显微镜的放大倍率，确保能清晰地观察到目标细胞或组织区域。
二、激光设置与定位
激光设置：
根据需要设置适当的激光功率和焦距，以确保激光能够精准地切割目标区域。
激光波长通常在紫外或红外范围内，可以与不同的样本类型进行兼容。
定位目标区域：
通过显微镜实时观察，定位需要捕获的目标区域。
操作人员可以通过图像来确定目标区域的形状和大小，并确保其周围区域清晰可见。
三、激光切割与捕获
激光切割：
使用激光束直接切割目标区域的组织。
激光切割过程会将切割的组织区域加热，形成蒸汽压力，进而分离该区域。
激光可精确地去除目标细胞或组织，避免损伤周围细胞。
捕获目标细胞或区域：
在激光切割的同时，使用一种透明的聚合物膜（如聚乙烯醇膜或乙烯乙酸乙烯酯膜）覆盖在目标区域上。
激光束照射聚合物膜底部，使其软化并产生黏附力，黏附目标组织或细胞于膜上。
待膜冷却后，与目标细胞或组织形成牢固的聚合物，从而使其与周围组织或细胞分离。
四、收集与后续分析
收集切割区域：
被切割的组织或细胞通过激光系统被收集到微小的塑料捕获帽或收集杯中。
这些容器通常可以包含用于进一步分析的溶液，如裂解液或消化缓冲液。
RNA/DNA/蛋白质提取：
从捕获的细胞或组织区域中提取RNA、DNA或蛋白质，用于后续的分子生物学分析。
这些提取物可用于qPCR、基因组测序、RNA-seq、Westernblot等实验。
数据分析：
通过对提取物的进一步分析，研究人员可以获得关于目标细胞群体或区域的详细分子信息，如基因表达谱、突变分析等。
分析数据可以通过高通量技术（如基因表达芯片、RNA-seq等）获得被捕获细胞的分子特征，进行差异分析或功能注释。
五、验证与设备维护
验证实验：
通常会进行验证实验，如免疫荧光染色、原位杂交等，以验证激光切割获取的样本是否代表了目标区域或细胞的特征。
设备清洁与软件更新：
定期对激光切割设备和显微镜进行清洁，以确保其正常运行。
检查并更新相关软件，以保持数据处理和分析的准确性。
